在誘導脂質囊泡膜融合和細胞內遞送的應用研究

高分子聚合物薄膜經高能重離子輻照後，在薄膜中沿入射離子路徑上會(hui) 形成圓柱狀損傷(shang) 區域，直徑約１０ｎｍ，這些損傷(shang) 區域稱作離子的潛徑跡，潛徑跡經過化學蝕刻處理可形成中空通道（孔），即為(wei) 核孔膜。相比於(yu) 常規濾膜，擁有眾(zhong) 多優(you) 點，如表麵平整光滑、孔徑均一、圓柱形孔形（圖１－１），此外還具有機械強度高、過濾速度快和截留特性好等優(you) 點。

核孔膜的生產(chan) 工藝主要包括輻照、紫外敏化和蝕刻等三個(ge) 主要步驟。輻照一般利用加速器或者反應堆進行，目前主要都采用加速器進行輻照。紫外敏化主要是改善核孔膜的孔形，讓錐度更小、透氣率更高、孔徑更均勻。化學蝕刻則決(jue) 定核孔膜最終孔徑大小

基於(yu) 的特點，其應用已相當廣泛。目前，很多微生物檢測、癌細胞的檢測以及氣體(ti) 的檢測都需要用到核孔膜截留取樣。在製藥工業(ye) ，核孔膜主要用於(yu) 藥用水的過濾及終端除菌過濾，血液製品的過濾，空氣與(yu) 蒸汽的過濾等。在食品飲料行業(ye) ，核孔膜用於(yu) 酒類、飲用水、奶製品、茶飲料等的澄清和除菌過濾，可代替離心法用於(yu) 分離，或代替熱處理法用於(yu) 除菌。在電子工業(ye) ，可用於(yu) 製備光刻膠及環境氣體(ti) 淨化，以提高電子產(chan) 品的質量和成品率。在化工業(ye) ，用於(yu) 製備超純試劑及溶劑中貴重的懸浮物和觸媒的回收等。此外，在藥用及化妝品用脂質體(ti) 製劑的研發和生產(chan) 中，基於(yu) 核孔膜的擠出法是脂質體(ti) 粒徑均一化及降低粒徑的方法之一。

本文基於(yu) 的擠出法進行了兩(liang) 部分研宄，一是擠出法誘導脂質囊泡膜融合並構建雜化外泌體(ti) ，二是基於(yu) 擠出法的細胞內(nei) 遞送研究。主要內(nei) 容及結果如下：

１、擠出法誘導熒光標記脂質體(ti) 與(yu) 空白脂質體(ti) 發生膜融合。采用熒光共振能量轉移法對膜融合過程進行了定性和定量分析，並檢測了膜融合前後脂質體(ti) 粒徑的變化，以凍融法作為(wei) 對照。結果顯示，經過擠出處理，焚光標記脂質體(ti) 和空白脂質體(ti) 發生了膜融合，也即熒光標記磷脂轉移到空白脂質體(ti) ，膜融合效率與(yu) 凍融法相當，且耗時較短。相比凍融法，所製得的膜融合脂質體(ti) 粒徑均一。

２、擠出法可誘導熒光標記脂質體(ti) 和外泌體(ti) 發生膜融合，即構建雜化外泌體(ti) 。首先用透射電鏡對從(cong) Ｋ５６２培養(yang) 上清提取的外泌體(ti) 進行了鑒定，然後利用擠出法誘導熒光標記脂質體(ti) 與(yu) 外泌體(ti) 發生膜融合，熒光共振能量轉移法對膜融合過程進行了定性和定量分析，並檢測了膜融合前後脂質囊泡粒徑的變化，以凍融法作為(wei) 對照。結果顯示，經過擠出處理，焚光標記脂質體(ti) 和外泌體(ti) 發生了膜融合，但透射電鏡下雜化外泌體(ti) 仍然保持了典型的茶托結構。擠出法的膜融合效率稍低於(yu) 凍融法，但其具有耗時短的優(you) 點。此外，擠出法製備的雜化外泌體(ti) 具有較均勻的粒徑，而凍融法構建的雜化外泌體(ti) 則粒徑及粒徑分布範圍都變大。

３、基於(yu) 的擠出法可通過誘導ＣＴ２６細胞變形及細胞膜短暫穿孔而將介質中各種大分子遞送進入細胞，經擠出處理的ＣＴ２６細胞仍可正常貼壁生長及增殖。膜孔徑和遞送材料的分子量是影響遞送效率的重要因素。不同分子量右旋糖酐經擠出遞送後，在細胞漿和細胞核都有分布，但是質核比與(yu) 分子量呈正相關(guan) 。

４、基於(yu) 的擠出法可通過誘導Ｋ５６２細胞變形及細胞膜短暫穿孔而將介質中各種大分子遞送進入細胞，經擠出處理的Ｋ５６２細胞任可正常生長及增殖。膜孔徑和遞送材料分子量是影響遞送效率的重要因素。此外，不同分子量的右旋糖酐經擠出遞送後，在細胞漿和細胞核都有分布，水合半徑大於(yu) 核膜複合體(ti) 被動擴散尺度上限的２ＭＤａ右旋糖酐主要在擠出處理後起初的１小時內(nei) 進入細胞核，這強烈提示擠出處理誘導了核膜破裂，從(cong) 而允許其進入細胞核。