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​scienova高通量透析原理
更新時間:2024-07-08   點擊次數:1044次

scienova高通量透析原理

 

透析法是利用半透膜將分子大小不同的蛋白質分開的技術,可以用於(yu) 蛋白分離和蛋白純化。自從(cong) 透析法被發明以來,透析已經成為(wei) 了生物化學實驗室最經常使用的分離純化技能之一,常和鹽析、鹽溶等方法聯合使用。該分離量較小、時間長,在生物大分子的製備過程當中,除鹽、少量有機溶劑、生物小分子雜質和濃縮樣品等都要用到透析的技能。然而將透析法用於(yu) 蛋白純化時,由於(yu) 透析主要的目的是換液,而絕大部分蛋白都屬於(yu) 大分子,所以透析能起到的純化效果是非常有限的。

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1、什麽(me) 是透析法

 

透析法是利用半透膜將蛋白質和其他小分子物質如無機鹽、單糖、雙糖等雜質分開,也可以將分子大小不同的蛋白質分開。半透膜的孔有大有小,可以根據待分離物質的分子質量來選擇適當的半透膜。將待純化的蛋白質溶液裝在半透膜做成的透析袋內(nei) ,放入透析液如蒸餾水或緩衝(chong) 液,適時跟換透析液,直至透析袋內(nei) 無機鹽等小分子物質減少到最小值為(wei) 止。美迪西提供蛋白表達純化服務,可以為(wei) 客戶在蛋白表達純化方麵提供多種選擇,包括從(cong) 方案設計、基因優(you) 化、表達條件優(you) 化到純化的技術體(ti) 係,以提高客戶的目的蛋白表達水平。

 

在蛋白分離和蛋白純化過程中,透析隻需要使用專(zhuan) 用的半透膜便可完成。通常是將半透膜製成袋狀,將生物大分子樣品溶液置入袋內(nei) ,將此透析袋浸入水或者緩衝(chong) 液中,樣品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋內(nei) ,而鹽和小分子物質不停擴散透析到袋外,直到袋內(nei) 外兩(liang) 邊的濃度到達平衡為(wei) 止。保留在透析袋內(nei) 未透析出的樣品溶液稱為(wei) “保留液",袋(膜)外的溶液稱為(wei) “滲出液"或者“透析液"。透析的動力是擴散壓,擴散壓是由橫跨膜兩(liang) 邊的濃度梯度形成的。透析的速度反比於(yu) 膜的厚度,正比於(yu) 欲透析的小分子溶質在膜內(nei) 外兩(liang) 邊的濃度梯度,還正比於(yu) 膜的麵積和溫度,通常是4℃透析,升高溫度可加快透析速度。

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2、透析法分離鹽

 

鹽析法是在蛋白質溶液中加入一定濃度的中性鹽,讓蛋白質從(cong) 溶液中沉澱析出的方法。蛋白質用鹽析法沉澱分離後,需脫鹽才能獲得純品,脫鹽常用的方法為(wei) 透析法。蛋白質在溶液中因其膠體(ti) 質點直徑較大,不能透過半透膜,而無機鹽及其它低分子物質可以透過,故利用透析法可以把經鹽析法所得的蛋白質提純。

 

3、透析法去除小分子雜質

 

有研究者進行了對自提精製裙帶菜粗多糖(UPPS)分離純化及體(ti) 外抗腫瘤活性研究[1]。方法是首先對裙帶菜粗多糖進行Sevage法除蛋白、H2O2法脫色素、透析法除去小分子;然後運用DEAE-52、SephadexG-200柱層析對裙帶菜多糖半純品進一步純化;最後采用MTT法測定了UPPS-B1對腫瘤細胞SGC-7901和HepG-2生長、增殖的抑製作用。結果發現裙帶菜粗多糖通過脫蛋白、脫色、透析後運用DEAE-52、SephadexG-200柱層析進行分離純化,得到一個(ge) 組分UPPS-B1。其對SGC-7901HepG-2均具有一定的抑製作用並具有劑量依賴性。因此UPPS-B1是均一度較好的多糖組分,具有抗腫瘤活性。

 

還有研究者考察了製備方式及製備條件等對生物素化高分子納米粒子粒徑大小的影響。方法是采用透析法製備生物素化兩(liang) 親(qin) 性共聚物納米粒子,通過單因素實驗對比納米粒子粒徑的大小。結果發現采用有機相滴加至水相的製備方法獲得的粒徑大小較適合用於(yu) 藥物載體(ti) ,且初始有機溶劑加入量對粒徑的影響較大。

 

而透析法作為(wei) 一種蛋白分離、蛋白純化方法,其純化功能非常有限,應采用多種分離方法來,以便分離和純化出生物學性質不變的蛋白質。

MD100一、Scienova 產(chan) 品介紹
1、
   是小體(ti) 積樣品透析的即用型係統,膜透析過程采用簡單易用的一次性透析管,樣品數量1-96個(ge) 樣品之間選擇。可以使用單個(ge) 透析管也可用高通量篩選的96個(ge) 樣本係統。Xpress透析裝置具有高通量處理樣品、高樣品回收率、樣品處理溫和、方便使用的特點。
   特別的幾何結構、膜麵積與(yu) 樣品體(ti) 積的合適比例以及小的擴散路徑,使得透析時間顯著縮短。能夠快速有效地純化蛋白質、RNA和DNA樣本,典型應用包括血漿蛋白結合率檢測、經消化後蛋白質樣品的純化、合成蛋白質樣品的純化、以及藥物相互作用和藥物結合、藥物開發及血清中遊離激素的檢測等。
   采用盒式即用型設計,可輕鬆使用實驗室移液管進行處理,與(yu) 微量微孔板、深孔板兼容,可用於(yu) 大多數移液係統和實驗室自動化係統,實現樣品透析過程的自動化,特別適合於(yu) 高通量篩選或篩查實驗。Xpress透析器實現了小樣品量、大量樣本的安全有效前處理,性價(jia) 比高。

1
   包括係列產(chan) 品,型號有 MD100、ED300、MD300、MD1000、XDR-1。產(chan) 品采用低結合的再生纖維素膜,截留分子量(MWCO)為(wei) 2, 3.5, 6-8, 20 kDa,溫度 1-60°C,pH值 4-8。采用Bio-Xell ® 生物纖維素膜,截留分子量2, 3.5 ,6–8,12–14 ,20, 140 kDa,溫度1-60°C,pH值5-8。

的優(you) 勢:

   高樣品通量,樣品製備時間減少2至12倍

   高收率,回收率達98%

   采用微量微孔板,可用於(yu) 液體(ti) 處理係統

   使用標準移液槍加載和提取樣品

   可高壓滅菌
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2、實驗室透析管
    門用於(yu) 少量樣品的透析,小型透析管適用10-250μL 樣品,中型透析管適用100-800μL樣品,大型透析管適用0.1-3ml樣品,超大型透析管適合10-20ml樣品。產(chan) 品由不含重金屬和硫化物的高純度再生纖維素製成的高質量膜製成,樣品回收率高,達97%,易於(yu) 使用實驗室移液槍進行處理,可用於(yu) 單個(ge) 樣品的透析、清洗、緩衝(chong) 及濃縮,蛋白質與(yu) 蛋白質,蛋白質DNA 及蛋白質RNA 等複合物形成研究,以及MALDI-MS分析的蛋白質樣品前處理。

二、產(chan) 品應用
可用於(yu) 實驗室透析的多個(ge) 領域,包括:

    除鹽、除溶劑,除洗滌劑

    複合物形成研究(蛋白質-蛋白質,蛋白質-DNA,蛋白質-RNA)

    樣品、蛋白質提取物或者細胞提取物的pH和緩衝(chong) 液的調節

    小氨基酸的肽透析

    病毒顆粒的純化

    除去被汙染的小分子

蛋白質透析、蛋白樣品前處理等

 

通量微量需求的合適產(chan) 品;

效率是同類產(chan) 品的2-20倍;

樣品回收率最高可達98%;

樣品加取方便、即拿即用



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